# HG changeset patch # User iuc # Date 1509788471 14400 # Node ID 2445d53549ba64842b5820fa23e9fb94cfa1aa37 planemo upload for repository https://github.com/galaxyproject/tools-iuc/tree/master/tools/minimap2 commit 7cb87c310b34cb2af2547ad8a14679107fd86d5d diff -r 000000000000 -r 2445d53549ba all_fasta.loc.sample --- /dev/null Thu Jan 01 00:00:00 1970 +0000 +++ b/all_fasta.loc.sample Sat Nov 04 05:41:11 2017 -0400 @@ -0,0 +1,18 @@ +#This file lists the locations and dbkeys of all the fasta files +#under the "genome" directory (a directory that contains a directory +#for each build). The script extract_fasta.py will generate the file +#all_fasta.loc. This file has the format (white space characters are +#TAB characters): +# +# +# +#So, all_fasta.loc could look something like this: +# +#apiMel3 apiMel3 Honeybee (Apis mellifera): apiMel3 /path/to/genome/apiMel3/apiMel3.fa +#hg19canon hg19 Human (Homo sapiens): hg19 Canonical /path/to/genome/hg19/hg19canon.fa +#hg19full hg19 Human (Homo sapiens): hg19 Full /path/to/genome/hg19/hg19full.fa +# +#Your all_fasta.loc file should contain an entry for each individual +#fasta file. So there will be multiple fasta files for each build, +#such as with hg19 above. +# diff -r 000000000000 -r 2445d53549ba minimap2.xml --- /dev/null Thu Jan 01 00:00:00 1970 +0000 +++ b/minimap2.xml Sat Nov 04 05:41:11 2017 -0400 @@ -0,0 +1,539 @@ + + + A fast pairwise aligner for genomic and spliced nucleotide sequences + + minimap2 + samtools + + minimap2 --version + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + +
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It +is more accurate on simulated long reads and produces biologically +meaningful alignment ready for downstream analyses. For >100bp Illumina +short reads, minimap2 is three times as fast as BWA-MEM and Bowtie2, and +as accurate on simulated data. Detailed evaluations are available from +the `minimap2 preprint`. + +General usage +~~~~~~~~~~~~~ + +Minimap2 seamlessly works with gzip’d FASTA and FASTQ formats as input. +You don’t need to convert between FASTA and FASTQ or decompress gzip’d +files first. + +For the human reference genome, minimap2 takes a few minutes to generate +a minimizer index for the reference before mapping. To reduce indexing +time, you can optionally save the index with option **-d** and replace +the reference sequence file with the index file on the minimap2 command +line: + +***Importantly***, it should be noted that once you build the index, +indexing parameters such as **-k**, **-w**, **-H** and **-I** can’t be +changed during mapping. If you are running minimap2 for different data +types, you will probably need to keep multiple indexes generated with +different parameters. This makes minimap2 different from BWA which +always uses the same index regardless of query data types. + +Use cases +~~~~~~~~~ + +Minimap2 uses the same base algorithm for all applications. However, due +to the different data types it supports (e.g. short vs long reads; DNA +vs mRNA reads), minimap2 needs to be tuned for optimal performance and +accuracy. It is usually recommended to choose a preset with option +**-x**, which sets multiple parameters at the same time. The default +setting is the same as ``map-ont``. + +Map long noisy genomic reads +^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^ + +The difference between ``map-pb`` and ``map-ont`` is that ``map-pb`` +uses homopolymer-compressed (HPC) minimizers as seeds, while ``map-ont`` +uses ordinary minimizers as seeds. Emperical evaluation suggests HPC +minimizers improve performance and sensitivity when aligning PacBio +reads, but hurt when aligning Nanopore reads. + +Map long mRNA/cDNA reads +^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^ + + +There are different long-read RNA-seq technologies, including +tranditional full-length cDNA, EST, PacBio Iso-seq, Nanopore 2D cDNA-seq +and Direct RNA-seq. They produce data of varying quality and properties. +By default, ``-x splice`` assumes the read orientation relative to the +transcript strand is unknown. It tries two rounds of alignment to infer +the orientation and write the strand to the ``ts`` SAM/PAF tag if +possible. For Iso-seq, Direct RNA-seq and tranditional full-length +cDNAs, it would be desired to apply ``-u f`` to force minimap2 to +consider the forward transcript strand only. This speeds up alignment +with slight improvement to accuracy. For noisy Nanopore Direct RNA-seq +reads, it is recommended to use a smaller k-mer size for increased +sensitivity to the first or the last exons. + +It is worth noting that by default ``-x splice`` prefers +GT[A/G]..[C/T]AG over GT[C/T]..[A/G]AG, and then over other splicing +signals. Considering one additional base improves the junction accuracy +for noisy reads, but reduces the accuracy when aligning against the +widely used SIRV control data. This is because SIRV does not honor the +evolutionarily conservative splicing signal. If you are studying SIRV, +you may apply ``--splice-flank=no`` to let minimap2 only model GT..AG, +ignoring the additional base. + +Find overlaps between long reads +^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^ + +Similarly, ``ava-pb`` uses HPC minimizers while ``ava-ont`` uses +ordinary minimizers. It is usually not recommended to perform base-level +alignment in the overlapping mode because it is slow and may produce +false positive overlaps. However, if performance is not a concern, you +may try to add ``-a`` or ``-c`` anyway. + +Map short accurate genomic reads +^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^ + + +When two read files are specified, minimap2 reads from each file in turn +and merge them into an interleaved stream internally. Two reads are +considered to be paired if they are adjacent in the input stream and +have the same name (with the ``/[0-9]`` suffix trimmed if present). +Single- and paired-end reads can be mixed. + +Minimap2 does not work well with short spliced reads. There are many +capable RNA-seq mappers for short reads. + +Full genome/assembly alignment +^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^ + +For cross-species full-genome alignment, the scoring system needs to be +tuned according to the sequence divergence. + +Advanced features +~~~~~~~~~~~~~~~~~ + +Working with >65535 CIGAR operations +^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^ + +Due to a design flaw, BAM does not work with CIGAR strings with >65535 +operations (SAM and CRAM work). However, for ultra-long nanopore reads +minimap2 may align ~1% of read bases with long CIGARs beyond the +capability of BAM. If you convert such SAM/CRAM to BAM, Picard and +recent samtools will throw an error and abort. Older samtools and other +tools may create corrupted BAM. + +To avoid this issue, you can add option ``-L`` at the minimap2 command +line. This option moves a long CIGAR to the ``CG`` tag and leaves a +fully clipped CIGAR at the SAM CIGAR column. Current tools that don’t +read CIGAR (e.g. merging and sorting) still work with such BAM records; +tools that read CIGAR will effectively ignore these records. I have pull +requests to the SAM spec, htslib, htsjdk, bedtools2, Rsamtools and +igv.js. If they are accepted, future versions of these tools will +seamlessly recognize long-cigar records generated by option ``-L``. + +**TD;DR**: if you work with ultra-long reads and use tools that only +process BAM files, please add option ``-L``. + +The cs optional tag +^^^^^^^^^^^^^^^^^^^ + +The ``cs`` SAM/PAF tag encodes bases at mismatches and INDELs. It +matches regular expression +``/(:[0-9]+|\*[a-z][a-z]|[=\+\-][A-Za-z]+)+/``. Like CIGAR, ``cs`` +consists of series of operations. Each leading character specifies the +operation; the following sequence is the one involved in the operation. + +The ``cs`` tag is enabled by command line option ``--cs``. The following +alignment, for example: + +.. code:: + + CGATCGATAAATAGAGTAG---GAATAGCA + |||||| |||||||||| |||| ||| + CGATCG---AATAGAGTAGGTCGAATtGCA + +is represented as ``:6-ata:10+gtc:4*at:3``, where ``:[0-9]+`` represents +an identical block, ``-ata`` represents a deltion, ``+gtc`` an insertion +and ``*at`` indicates reference base ``a`` is substituted with a query +base ``t``. It is similar to the ``MD`` SAM tag but is standalone and +easier to parse. + +If ``--cs=long`` is used, the ``cs`` string also contains identical +sequences in the alignment. The above example will become +``=CGATCG-ata=AATAGAGTAG+gtc=GAAT*at=GCA``. The long form of ``cs`` +encodes both reference and query sequences in one string. + +Algorithm overview +~~~~~~~~~~~~~~~~~~ + +In the following, minimap2 command line options have a dash ahead and +are highlighted in bold. The description may help to tune minimap2 +parameters. + +1. Read **-I** [=*4G*] reference bases, extract + (**-k**,\ **-w**)-minimizers and index them in a hash table. + +2. Read **-K** [=*200M*] query bases. For each query sequence, do step 3 + through 7: + +3. For each (**-k**,\ **-w**)-minimizer on the query, check against the + reference index. If a reference minimizer is not among the top **-f** + [=*2e-4*] most frequent, collect its the occurrences in the + reference, which are called *seeds*. + +4. Sort seeds by position in the reference. Chain them with dynamic + programming. Each chain represents a potential mapping. For read + overlapping, report all chains and then go to step 8. For reference + mapping, do step 5 through 7: + +5. Let *P* be the set of primary mappings, which is an empty set + initially. For each chain from the best to the worst according to + their chaining scores: if on the query, the chain overlaps with a + chain in *P* by **–mask-level** [=*0.5*] or higher fraction of the + shorter chain, mark the chain as *secondary* to the chain in *P*; + otherwise, add the chain to *P*. + +6. Retain all primary mappings. Also retain up to **-N** [=*5*] top + secondary mappings if their chaining scores are higher than **-p** + [=*0.8*] of their corresponding primary mappings. + +7. If alignment is requested, filter out an internal seed if it + potentially leads to both a long insertion and a long deletion. + Extend from the left-most seed. Perform global alignments between + internal seeds. Split the chain if the accumulative score along the + global alignment drops by **-z** [=*400*], disregarding long gaps. + Extend from the right-most seed. Output chains and their alignments. + +8. If there are more query sequences in the input, go to step 2 until no + more queries are left. + +9. If there are more reference sequences, reopen the query file from the + start and go to step 1; otherwise stop. + +Limitations +----------- + +- Minimap2 may produce suboptimal alignments through long + low-complexity regions where seed positions may be suboptimal. This + should not be a big concern because even the optimal alignment may be + wrong in such regions. + + + 10.1093/bioinformatics/btp324 + 10.1093/bioinformatics/btp698 + @misc{1303.3997, + Author = {Heng Li}, + Title = {Minimap2: fast pairwise alignment for long nucleotide sequences}, + Year = {2017}, + Eprint = {arXiv:1708.01492}, + url = {https://arxiv.org/abs/1708.01492}, + } + +
diff -r 000000000000 -r 2445d53549ba test-data/all_fasta.loc --- /dev/null Thu Jan 01 00:00:00 1970 +0000 +++ b/test-data/all_fasta.loc Sat Nov 04 05:41:11 2017 -0400 @@ -0,0 +1,1 @@ +bwa-mem-mt-genome bwa-mem-mt-genome bwa-mem-mt-genome ${__HERE__}/bwa-mem-mt-genome.fa \ No newline at end of file diff -r 000000000000 -r 2445d53549ba test-data/bwa-mem-fasta1.fa --- /dev/null Thu Jan 01 00:00:00 1970 +0000 +++ b/test-data/bwa-mem-fasta1.fa Sat Nov 04 05:41:11 2017 -0400 @@ -0,0 +1,200 @@ +>M01368:8:000000000-A3GHV:1:1101:6911:8255/1 +ATCTGGTTCCTACTTCAGGGCCATAAAACCTAAATAGCCCACACGTTCCCCTTAAATAAGACATCACGATGGATCACAGGTCTATCACCCTATTAACCACTCACGGGAGCTCTCCATGCATTTGGTATTTTCGTCTGGGGGGTGTGCACGCGATAGCATTGCGAGACGCTGGAGCCGGAGCACCCTATGTCGCAGTATCTGTCTTTGATTCCTGCCTCATCCTATTATTTATCGCACCTACGTTCAATATT +>M01368:8:000000000-A3GHV:1:1101:14518:9998/1 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+CACTTGGGGGTAGCTAAAGTGAACTGTATCCGACATCTGGTTCCTACTTCAGGGTCATAAAACCTAAATAGCCCACACGTTCCCCTTAAATAAGACATCACGATGGATCACAGGTCTATCACCCTATTAACCACTCACGGGAGCTCTCCATGCATTTGGTATTTTCGTCTGGGGGGTGTGCACGCGATAGCATTGCGAGACGCTGGAGCCGGAGCACCCTATGTCGCAGTATCTGTCTTTGATTCCTGCCT +>M01368:8:000000000-A3GHV:1:1102:21788:11027/1 +GCCCACACGTTCCCCTTAAATAAGACATCACGATGGATCACAGGTCTATCACCCTATTAACCACTCACGGGAGCTCTCCATGCATTTGGTATTTTCGTCTGGGGGGTGTGCACGCGATAGCATTGCGAGACGCTGGAGCCGGAGCACCCTATGTCGCAGTATCTGTCTTTGATTCCTGCCTCATCCTATTATTTATCGCACCTACGTTCAATATTACAGGCGAACATACTTACTAAAGTGTGTTAATTCTG +>M01368:8:000000000-A3GHV:1:1102:5728:8777/1 +ATATTGAACGTAGGTGCGATAAATAATAGGATGAGGCAGGAATCAAAGACAGATACTGCGACATAGGGTGCTCCGGCTCCAGCGTCTCGCAATGCTATCGCGTGCACACCCCCCAGACGAAAATACCAAATGCATGGAGAGCTCCCGTGAGTGGTTAATAGGGTGATAGACCTGTGATCCATCGTGATGTCTTATTTAAGGGGAACGTGTGGGCTATTTAGGTTTTATGACCCTGAAGTAGGAACCAGATG +>M01368:8:000000000-A3GHV:1:1102:5983:21093/1 +GTATCCGACATCTGGTTCCTACTTCAGGGTCATAAAACCTAAATAGCCCACACGTTCCCCTTAAATAAGACATCACGATGGATCACAGGTCTATCACCCTATTAACCACTCACGGGAGCTCTCCATGCATTTGGTATTTTCGTCTGGGGGGTGTGCACGCGATAGCATTGCGAGACGCTGGAGCCGGAGCACCCTATGTCGCAGTATCTGTCTTTGATTCCTGCCTCATCCTATTATTTATCGCACCTACG +>M01368:8:000000000-A3GHV:1:1102:7765:18353/1 +CTCCGGGCCCATAACACTTGGGGGTAGCTAAAGTGAACTGTATCCGACATCTGGTTCCTACTTCAGGGTCATAAAACCTAAATAGCCCACACGTTCCCCTTAAATAAGACATCACGATGGATCACAGGTCTATCACCCTATTAACCACTCACGGGAGCTCTCCATGCATTTGGTATTTTCGTCTGGGGGGTGTGCACGCGATAGCATTGCGAGACGCTGGAGCCGGAGCACCCTATGTCGCAGTATCTGTC +>M01368:8:000000000-A3GHV:1:1103:10405:17879/1 +GTATCCGACATCTGGTTCCTACTTCAGGGTCATAAAACCTAAATAGCCCACACGTTCCCCTTAAATAAGACATCACGATGGATCACAGGTCTATCACCCTATTAACCACTCACGGGAGCTCTCCATGCATTTGGTATTTTCGTCTGGGGGGTGTGCACGCGATAGCATTGCGAGACGCTGGAGCCGGAGCACCCTATGTCGCAGTATCTGTCTTTGATTCCTGCCTCATCCTATTATTTATCGCACCTACG +>M01368:8:000000000-A3GHV:1:1103:13493:8205/1 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+AAAGCGAACTGTATCCGACATCTGGTTCCTACTTCAGGGTCATAAAACCTAAATAGCCCACACGTTCCCCTTAAATAAGACATCACGATGGATCACAGGTCTATCACCCTATTAACCACTCACGGGAGCTCTCCATGCATTTGGTATTTTCGTCTGGGGGGTGTGCACGCGATAGCATTGCGAGACGCTGGAGCCGGAGCACCCTATGTCGCAGTATCTGTCTTTGATTCCTGCCTCATCCTATTATTTAT +>M01368:8:000000000-A3GHV:1:1103:23099:3794/1 +AAGACAGATACTGCGACATAGGGTGTTCCGGCTCCAGCGTCTCGCAATGCTATCGCGTGCACACCCCCCAGACGAAAATACCAAATGCATGGAGAGCTCTCGTGAGTGGTTAATAGGGTGATAGACCTGTGATCCATCGTGATGTCTTATTTAAGGGGAACGTGTGGGCTATTTAGGTTTTATGACCCTGAAGCTGTCTCTTATACACATCTCCGAGCCCACGAGACTAAGGCGAATCTCGGATGCCGTCT +>M01368:8:000000000-A3GHV:1:1103:25465:20010/1 +GACATAGGGTGCTCCGGCTCCAGCGTCTCGCAATGCTATCGCGTGCACACCCCCCAGACGAAAATACCAAATGCATGGAGAGCTCCCGTGAGTGGTTAATCGGGTGATAGACCTGTGATCCATCGTGATGTCTTATTTAAGGGGAACGTGTGGGCTATTTAGGTTCTGTCTCTTATACACATCTCCGAGCCCACGAGACTAAGGCGAATCTCGTATGCCGTCTTCTGCTTGAAAAAAAAAAAACAACAGAC +>M01368:8:000000000-A3GHV:1:1103:25519:6301/1 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