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--- a/smudgeplot.xml Sun May 08 10:43:40 2022 +0000 +++ b/smudgeplot.xml Thu Jun 30 22:45:21 2022 +0000 @@ -1,5 +1,5 @@ -<tool id="smudgeplot" name="Smudgeplot" version="@TOOL_VERSION@+galaxy+@VERSION_SUFFIX@"> - <description> - inference of ploidy and heterozygosity structure using whole genome sequencing</description> +<tool id="smudgeplot" name="Smudgeplot" version="@TOOL_VERSION@+galaxy+@VERSION_SUFFIX@" profile="21.05"> + <description>inference of ploidy and heterozygosity structure using whole genome sequencing</description> <macros> <token name="@TOOL_VERSION@">0.2.5</token> @@ -24,7 +24,7 @@ ## Jellyfish kmer count ## --------------------------------------------------------------------- - #if $file.input.reads[0].is_of_type("fastq.gz") or $file.input.reads[0].is_of_type("fasta.gz") + #if $file.input.reads[0].is_of_type("fastqsanger.gz") or $file.input.reads[0].is_of_type("fasta.gz") gunzip -c #for $f in $file.input.reads #if $f @@ -89,13 +89,13 @@ help="For more control, create your own Kmer dump using Jellyfish. See Smudgeplot on GitHub for more details: https://github.com/KamilSJaron/smudgeplot" > - <option value="reads" selected="true"> Sequencing reads </option> - <option value="dump"> Kmer dump file </option> + <option value="reads" selected="true">Sequencing reads</option> + <option value="dump">Kmer dump file</option> </param> <when value="reads"> <param - name="reads" type="data" format="fastq,fasta" + name="reads" type="data" format="fastqsanger,fastqsanger.gz,fasta.gz,fasta" label="Sequencing reads" multiple="true" help="Sequencing reads corresponding to your genome. Don't worry about read pairing as it is not used in Kmer-counting. @@ -142,47 +142,88 @@ </inputs> <outputs> - <data - name="smudgeplot" format="png" - from_work_dir="my_genome_smudgeplot.png" - label="${tool.name} on ${on_string}: Smudgeplot" - /> - <data - name="smudgeplot_log" format="png" - from_work_dir="my_genome_smudgeplot_log10.png" - label="${tool.name} on ${on_string}: Smudgeplot (log10)" - /> - <data - name="genome_summary" format="tabular" - from_work_dir="my_genome_summary_table.tsv" - label="${tool.name} on ${on_string}: Genome summary table" - > - <filter>table_output</filter> - </data> - <data - name="genome_summary_verbose" format="txt" - from_work_dir="my_genome_verbose_summary.txt" - label="${tool.name} on ${on_string}: Genome verbose summary" - > - <filter>verbose_output</filter> - </data> - <data - name="genome_warnings" format="txt" - from_work_dir="my_genome_warnings.txt" - label="${tool.name} on ${on_string}: Genome warnings" - > - <filter>warnings_output</filter> - </data> + <data + name="smudgeplot" format="png" + from_work_dir="my_genome_smudgeplot.png" + label="${tool.name} on ${on_string}: Smudgeplot" + /> + <data + name="smudgeplot_log" format="png" + from_work_dir="my_genome_smudgeplot_log10.png" + label="${tool.name} on ${on_string}: Smudgeplot (log10)" + /> + <data + name="genome_summary" format="tabular" + from_work_dir="my_genome_summary_table.tsv" + label="${tool.name} on ${on_string}: Genome summary table" + > + <filter>table_output</filter> + </data> + <data + name="genome_summary_verbose" format="txt" + from_work_dir="my_genome_verbose_summary.txt" + label="${tool.name} on ${on_string}: Genome verbose summary" + > + <filter>verbose_output</filter> + </data> + <data + name="genome_warnings" format="txt" + from_work_dir="my_genome_warnings.txt" + label="${tool.name} on ${on_string}: Genome warnings" + > + <filter>warnings_output</filter> + </data> </outputs> <tests> - <test> - <param name="input_select" value="reads"/> - <param name="reads" value="test_reads.fasta" ftype="fasta"/> - <param name="lower_cutoff" value="2"/> - <param name="upper_cutoff" value="25"/> - <output name="smudgeplot" ftype="png" file="my_genome_smudgeplot.png" compare="sim_size"/> - </test> + <!-- Standard run --> + <test expect_num_outputs="2"> + <param name="input_select" value="reads"/> + <param name="reads" value="test_reads.fasta" ftype="fasta"/> + <param name="lower_cutoff" value="2"/> + <param name="upper_cutoff" value="25"/> + <output name="smudgeplot" ftype="png" file="my_genome_smudgeplot.png" compare="sim_size"/> + </test> + <!-- Standard run with gzipped input --> + <test expect_num_outputs="2"> + <param name="input_select" value="reads"/> + <param name="reads" value="test_reads.fasta.gz" ftype="fasta.gz"/> + <param name="lower_cutoff" value="2"/> + <param name="upper_cutoff" value="25"/> + <output name="smudgeplot" ftype="png" file="my_genome_smudgeplot.png" compare="sim_size"/> + </test> + <!-- Multiple input read files --> + <test expect_num_outputs="2"> + <param name="input_select" value="reads"/> + <param name="lower_cutoff" value="2"/> + <param name="upper_cutoff" value="80"/> + <param + name="reads" + value="test_reads.fasta,test_reads_2.fasta,test_reads_3.fasta" + ftype="fasta" + /> + <output name="smudgeplot" ftype="png" file="my_genome_smudgeplot.png" compare="sim_size"/> + </test> + <!-- With additional outputs--> + <test expect_num_outputs="5"> + <param name="input_select" value="reads"/> + <param name="reads" value="test_reads.fasta" ftype="fasta"/> + <param name="lower_cutoff" value="2"/> + <param name="upper_cutoff" value="25"/> + <param name="table_output" value="true"/> + <param name="verbose_output" value="true"/> + <param name="warnings_output" value="true"/> + <output name="smudgeplot" ftype="png" file="my_genome_smudgeplot.png" compare="sim_size"/> + <output name="genome_summary" ftype="tabular" file="my_genome_summary_table.tsv"/> + <output name="genome_summary_verbose" ftype="txt" file="my_genome_verbose_summary.txt"/> + <output name="genome_warnings" ftype="txt" file="my_genome_warnings.txt"/> + </test> + <!-- K-mer dump input --> + <test expect_num_outputs="2"> + <param name="input_select" value="dump"/> + <param name="dump" value="dump.jf" ftype="txt"/> + <output name="smudgeplot" ftype="png" file="my_genome_smudgeplot.png" compare="sim_size"/> + </test> </tests> <help><![CDATA[ @@ -195,9 +236,9 @@ Smudgeplots are computed from raw or even better from trimmed reads and show the haplotype structure using heterozygous kmer pairs. For example: -.. image:: https://raw.githubusercontent.com/usegalaxy-au/tools-au/master/tools/smudgeplot/static/img/smudge.png +.. image:: $PATH_TO_IMAGES/smudge.png :height: 520 - :alt: Smudge plot image + :alt: Example smudgeplot graph Every haplotype structure has a unique smudge on the graph and the heat of the smudge indicates how frequently the haplotype structure is represented in the genome compared to the other structures. The image above is an ideal case, where the sequencing coverage is sufficient to beautifully separate all the smudges, providing very strong and clear evidence of triploidy. @@ -246,6 +287,6 @@ ]]></help> <citations> - <citation type="doi">https://doi.org/10.1038/s41467-020-14998-3</citation> + <citation type="doi">10.1038/s41467-020-14998-3</citation> </citations> </tool>
--- /dev/null Thu Jan 01 00:00:00 1970 +0000 +++ b/test-data/dump.jf Thu Jun 30 22:45:21 2022 +0000 @@ -0,0 +1,2575 @@ +CCCCTCCCAGTAGTTTTGCTA 24 +ACAATTGGGACGGGGAGTAAA 24 +AAAGCAAAGTTAATTGCGACG 25 +GCTGGATTTCTGTAGCTTATA 2 +ATGTTCAAGATAACGATCCAC 25 +TACATTCGGTACGTAGAGGGA 25 +ACGACGGCGGACTCAAACACT 24 +ACTGGAATATCGGGAGACCCC 25 +TGTTGACATGTATAGGCAACA 25 +CATCGCTGGCAAGTGTTGTCG 24 +GTGAGAAGTTCCCTCTACGTA 25 +CAGAGAAACACCCTGTCGCAC 25 +ATGCCCCTGTCCACACGAGAC 25 +GGGTAACAACCCTCTCAACCA 25 +AAGAAGCGATCAGTTCGCGAT 23 +GATACTGTATACGACAATTAC 25 +ATACGCACCGACGGATGTAAT 23 +CTCTCTCATATTTAAGCAAAC 25 +AGTTCCCTCTGCGTACCGAAT 24 +GTACTTAGATAGTTAGACCTA 25 +GTGTACTTTGTGGGTTATGCA 25 +CGAAAGAGACTGTGTGTTGAA 25 +ACAGTGGAACGGATTGCTCCC 25 +ATGGTACCTAGTCTGCAAGTG 25 +GAAAGAGTCTGTGAGTTGAAC 25 +AAGGAGGAATCGGAAATCGTG 25 +AAGTGACTATACGGTAGCAGA 25 +AAGTCAGTCGTCGGTCCCAGA 24 +GCACATCTTGGTCATGGTACC 25 +AAGATAACGATCCACCCGCTA 25 +ATATTGTTGGCTATACATGTC 24 +AATTAGTGGGATGAATTACAC 25 +ACTCCTTTTGGTAGGCTCTCC 24 +CTTGCTACTCTAGTCGGATAA 24 +CAACTAGGGGTAACCACCCTC 24 +ACCCTAATACCGTCGCAATTA 25 +GTATTCACATATACGTCCCAA 25 +CGTATTCTAGACAGGTGACTC 25 +AGTGGAACGGAGTGCTCCCCC 25 +AGAATCTTAGTGCATAACCCA 25 +CGCATGGTTCAACTCACAGAC 25 +GGGCTTCAGTTGAGATGAAAC 25 +AAAAGGAGTTGGCAGCCATAC 24 +CTTGCTACTCGAGTCGGATAA 25 +GGTTGGCAGCCATACATTTCA 25 +ATGTATAGCCAACAATATACC 24 +AAGAAAACGATCCACCCGCTA 23 +CCCTAGTCTGCAAGTGATTGC 24 +CAAGTGTAATTCATCCCACTA 25 +CGCGCTTGGTATATTGTTGCC 25 +ACGCATAACAGGGAAGATTCG 25 +CTGTGTGTTGAACCATGCGGC 25 +CTCAGTCTCAGGACCCACTAC 24 +GGGTGGATCGTTATCTTGAAC 25 +CTGATATCTGTACAAATTTGC 25 +TCCGACAACACTTGCCAGCGA 24 +CTCCACGGTCTCATGAACCAC 24 +GAACGGAGTGCTCCCCCCCCC 25 +ACGACTGACTCGTATTCTAGA 25 +ACCGCCAACCTAACTACACAC 25 +AACAAGAGACCGCGAACTGAT 24 +AGACTGTGTGTTGAACCATGC 25 +AGTTTCGAGGTGTGTTCCTAG 25 +AGACTGCGTAAGAAAATAACC 25 +CAGTCGTCGGTACCAGAAACA 25 +AACCGCCAACCTAACTACACA 25 +ACGTGGCACAGTGGAACGGAT 25 +GTCGTCTGCGAAGCCCTTTCA 25 +ATTTTCTTACGAAGTCTGCCG 25 +ACATATGAAAAGGGTGATGAT 25 +GTTGGGACGTATATGTGAATA 25 +AGCCAGAGAGCCTACCAAAAG 25 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+CCGGATAAGCATATAAGAGCA 25 +AAACACTTACCTTGCCATCGC 25 +AGGTGTGTTCCTAGGGCGATA 25 +ATAGTGCGGGTACACGTGGTG 24 +AGTCGTCGGTACCAGAAACAG 25 +CCTAATACCGTCGCTATTAAC 24 +CGTCCCAATTGTCACGAGCAG 25 +AGTCGTCGGTCCCAGAAACAG 25 +ATGGTTGAGAGGGTGGTTACC 24 +AGTTGAACCATGCGGCTGGTA 25 +GTCAAAAGAACTTCTTTGCAC 24 +ATAGGCAACAATATACCAAGC 25 +CATATATATTGTAAACCATGC 23 +ATGAGGCCGTGGAGTCCTTGC 25 +ATATATACGCGGCGTTTAGTA 24 +CGCCGCGTACTTAGTGCGACA 24 +TATCGAAACGTCGCGGCTAGA 25 +GAAGTTCCCTCTACGTACCGA 25 +GTGTTGACATGTATAGCCAAC 24 +CGATAAACGCATAACAGGGAA 25 +GAGATGAAACTAATGCGAAGC 24 +CGGGGTCTCCCGATATTCCAG 25 +TACTTGGCAAACCCTGATCAA 25 +ATTTTCCAGTTTGCGGTCGCC 25 +CACGTTTGGGCGCCCGTACTG 24 +AGGAACCGCCACCCTAACTAC 25 +TAGTGCAGGTCGAATTGAAAA 25 +TCCAGCTTTTTAATGGACGCA 25 +AATTCGACCTGAATTAGTGGG 25 +GAAAGCAAAGTTAATAGCGAC 24 +GAGTGCTCCCCCCCCCCTCCC 24 +AACGAGAGAGGTGAGACCGAA 24 +CGACGAATCGAATGGCCGGCC 23 +ATAAAGAGTCGTCTGCGAAGC 25 +AATACGATACTCAATCACCTG 24 +CAAACATTTACCTTGCCATGG 25 +CGTTTCGATAATCGATCAGCA 25 +GCCTACCAAAAGGGGTTGGCA 25 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+AGCATATGGTTTGAATTGATC 25 +CGCGAAAACCGGTCTCACCAC 25 +GTATACAGTCTCGTGTGGACA 25 +ATCCCAAAGTAGTGGGTCCTG 25 +ATGGCTGGCAAGTGTTGTCGG 25 +AGTCTCTTTCGATGAAAGGAC 25 +AATATTATCAGCTACAGAAAT 24 +AAAGTTCTGTCCAAGTAATTG 25 +CGTAGCGGGTGGATCGTTATC 25 +CAACACTTGCCAGCCATGGCA 25 +ATCAATGTTCTGAAGCATACA 25 +GGTACCGAGGCACAATGGAGA 25 +AGGTGTATTCCTAGGGCGATA 24 +CGAAGCCCTTTCATCGAAAGA 25 +ATACTAGCCAGAGAGCCTACC 25 +GCAGCTACTGAAACGCACCGA 24 +AACTAGTGGGTCCTGAGACTG 25 +GGTTCTTTACTCCCCGTCCCA 24 +GATATCTGTACAAATTTGCCC 25 +CTAGAATACAAGTCAGTCGTC 24 +ATTCATGTAACAAGAGACCGC 25 +TCGATGAAAGGGCTTCGCAGA 25 +AGGAATACACCTCGAATCTTC 25 +ACCTTGCCATGGCTGGCAAGT 25 +AACTGGAAAATTTTATGGAGA 25 +AGTTCGGTCTCACCTCTCACG 24 +GTCAAAGGAACTTCTTTGCAC 25 +CACGCGGTGGGTATTCACATA 24 +ACGCCATTGTTGTACTCAGTG 24 +ATAGGAGCGTGACACTGGAAT 25 +GGAAGATTCGAGGTGTATTCC 25 +CCCTACGCAGCTACTGAAACG 25 +ACGCGGCCGCGGATATCCCTC 24
--- /dev/null Thu Jan 01 00:00:00 1970 +0000 +++ b/test-data/my_genome_summary_table.tsv Thu Jun 30 22:45:21 2022 +0000 @@ -0,0 +1,2 @@ +peak kmers [#] kmers [proportion] summit B / (A + B) summit A + B +AB 973 1 0.49 47.57
--- /dev/null Thu Jan 01 00:00:00 1970 +0000 +++ b/test-data/my_genome_verbose_summary.txt Thu Jun 30 22:45:21 2022 +0000 @@ -0,0 +1,15 @@ +1n coverage estimates (Coverage of every haplotype; Don't confuse with genome coverage which is (ploidy * 1n coverage).) +* User defined 1n coverage: +* Subset 1n coverage estimate: 24.6 +* Highest peak 1n coverage estimate: 25 +1n coverage used in smudgeplot (one of the three above): 25 +* Proposed ploidy: 2 +* Minimal number of heterozygous loci: 47 +Note: This number is NOT an estimate of the total number heterozygous loci, it's merly setting the lower boundary if the inference of heterozygosity peaks is correct. +* Proportion of heterozygosity carried by pairs in different genome copies (table) + genome_copies propotion_of_heterozygosity +1 2 1 +* Proportion of heterozygosity carried by paralogs: 0 +* Summary of all detected peaks (table) + peak kmers [#] kmers [proportion] summit B / (A + B) summit A + B +1 AB 973 1 0.49 47.57
--- /dev/null Thu Jan 01 00:00:00 1970 +0000 +++ b/test-data/my_genome_warnings.txt Thu Jun 30 22:45:21 2022 +0000 @@ -0,0 +1,20 @@ + +###################### +## INPUT PROCESSING ## +###################### + +############# +## SUMMARY ## +############# +detecting two smudges at the same positions, not enough data for this number of bins lowering number of bins to 35 +detecting two smudges at the same positions, not enough data for this number of bins lowering number of bins to 30 +detecting two smudges at the same positions, not enough data for this number of bins lowering number of bins to 25 +detecting two smudges at the same positions, not enough data for this number of bins lowering number of bins to 20 +!! Warning, your coverage filter on the lower end (L = 23 ) is higher than half of the 1n coverage estimate ( 1n / 2 = 12.5 +If the real 1n coverage is half of your estimate you would not picked it up due to the filtering. +If you have sufficient coverage, consider reruning the analysis with lower L (something like (1n / 2) - 5) +One good way for verificaiton would be to compare it to GenomeScope estimate of haploid coverage + +########## +## PLOT ## +##########
--- /dev/null Thu Jan 01 00:00:00 1970 +0000 +++ b/test-data/test_reads_2.fasta Thu Jun 30 22:45:21 2022 +0000 @@ -0,0 +1,4 @@ +>maternal_hapl_sequences +TTGTACGGACTATTGCCTTGCAGCAGGTCTTAGCCAAATAGCTTCGCTTATCGTTTGAAATCTTAATCGGCCACCACACTATAATCTGTGGTGCTTCTATAGGCGCCTGGCTCGATCATCAGGTCAGCGTCTAGTAGGTTTCTAGCCGCGACGTTTTGATAATCGATCAGCAACTTAAAACTCGCGGGTAGGCCCATAATTTTGCAGTTCGCACCACCACAGTCTGCCATGGTCAACATTCGTTCGTTTGTATCAACCCCGGTGGGCCTCGTTGGAGATTCGCACCTACATAGTGTAACGGAACGATACAAGGCGACCCTGCAAGGAACAGCGTCGGTAATCGCTAGAAGCGATTCATGCGTCATCCGCAGCGGAGCAGGGCTTACGCGGCCGCGGATATCCCTCGTGTCGTCCAAGAGATACAGACAAGCAACATAAAGCAGTGTACTGTAACCCGAGAATAGACTAGTCTTAACGTTGGGAAATTTCACGGACCGAGATAAAGCCTTCTCCTAGGCCCTACGGCACTAATTTCGAGCAGCACTCCGAGACTTGAAGCGGCGACATGAATTTCAGCGATCATTCCCCCTAGTCCAGTCCAGCTTTTAAATGGACGCACAGAGTAACCTTTCATAGGAGTAAAAGGCGATAAACGCATAACAGGGAAGATTCGAGGTGTATTCCTAGGGCGATAACGAGAAAGTTCGATTGAGGCCGATAGTACTGCGCCGTATGTTATCGCGCGTTTTGGCGGATTTACCACTACCTTGGGACTTTTCGACAGTGCCCGGCGTTTGGCACTTCGACGCAGTTCCGTTACAGTGGGAAGAGCGTAGCAGCGCGCGAAAACCTGTCTCACCGCGTGTACCCGCACTATGGCCGTTTAGGCTGAAACAGCCTGTACTCCAAGTCGCTTATCGGAAATGGCGAAGGCACTTTCACGCACGCCGCGTACTTAGTGCGACAGGGTGTTTCTCTGCCGGTTGGCTATTGGTAGGCGACCTAGCATGGTACAGGCAAGTCCAACGTTGGACGTTCGGAACTCAACATCCCTTATATATGGGAGATACGAATCTATATATCCGCGGCGGTTAGTAGCATCAATGTTCTGAAGCATACATGGGCCGAAAGGAGGTTGTGGCACTAACGTCGTTCATCGTCACGGTAGCCTCACAGTGTGCCAATTACGGCGGCAGGACCAATGAAGCGTCAACGATGATATCACGGCACCAAGAACTGGCGTAATTTAGCCACTTACCGATTTAACTTTATGCATTTTATGGTATCAAAGTCTACCAATCAGCCGTGGGCATAGTTTACGGGAGATCCTCCAAGTCAAAGGAACTTCTTTGCACTATGGCGACCGCGTTTACCCTGCGACGAATCGAATGGCCGGCCCCTTAACCATGGGGGGATTCTTGCTACTCTAGTCGGATAAATCAAGGTGACGAAGTGACGGTCGGGAAGCCTGTCGTATGGAAATTATTTGCATGAGAATTATGACCTGTCTGGCAGCCCGCGCCGACCACCCTGTAGTACACTAAGCTCCATCGTGGGACATAGGCGCTTTCTAAATGTCAGCGGAACTTGGACGGTCGTATGTACGTGGACCCCACCTGGCCTACGCAACACTACGACCAATCGCAGTAGTCATTCCTATCTCCGAGCAAATAGTTTCGGGGGCCACAATTAGCCGCGGCGAGAAGACTACCGCGGGACGTTATGCTTTGGGCAATTCAGGAATTTGCTAGCAAACGCTCGGACGCAGCTAGGTGGTACCTTTACCGTACTGTGTACTTAGATAGTTAGACCTATTCAGCCGGAGAACCGCTGCTGCTACGATTCTGCCCGTCGTAGCGTCTAGCCGTACTGGTCATACAAGACATTACATGTGCCACGAGTGGATATCTCGGAAGAGAGCGACTATAAGGGTGGAATTAACCGGGGTATTACTGCAACCGCACTTGCAAAAAAAGACCGTAAGTTCCGGCTGGCGCGTACCGGATGTAGATCTTCACTGTGATTTCCACCGTAGACACACAAATATGGCGGAGGCCGTCTTACCTATCGCGTATTGACATCGAAGGCAGTGGACCGGAGCAAGCGCTGATTTTCTGACACGACCGAATGTACCTATAATACAGACTGTTGGGGCGTAACAATAGTCTTGCACATCGATGAGCTTGAGCTGTGAAGGTAATTAGTTCGGTCTCACCTCTCTCGTTTGGGCGCCCGTACTGTGCAACATGAGTGGCTTAGCCTTGCAAATACTAATACACGTGACGCGTTCCTGAAACAAGCGATGGATATCAGCGCCTAAGCTTGATATACTGCGTATATCCGTTGACCTCATATCGTGGTTCGGGGGTCACAGTAATGCCTGAATGCTTGGATGACGCCGAGCAACGGTAGCATCGATTCCGCCACGGGGGTAGTGCCCCGCGCGGGTCTGTTTCTGGTACCGACGACTGACTCGTATTCTAGACAGGTGACTCAAACTATGACAAGGGATTCCCCGGGCTCAACCCAATACACATTTAGTCACGTTGGGGCACTGCCTGTATCTTTTTGTTCCGACAACAGTTGCCAGCGATGGCAAGGTAAGTGTTTGAGTCCGCCGTCGTTTACCATGACCTAGGGTTACCCAGTCAAGATTATCACCTGACACCTCCAGCTATCGCCCGACTCCCTAAAAGATTTCTCGGAGACCTCAACTGTGGAAGCTTGCTGGATTTCTGTAGCTGATAATATAAGGACGCGAGCTGCGACAGCCACCAGACTTGAAACCTGTCGGGGGCTACCCACGGTGAGCTAGCGCTTGTAACCATCTGGCCCAACATAAGAAGTCTTAAGGGAGTGACTGCATCGTGTGGAAAAAACCAAGGCGTCATGAAAGATCGGTACCCTCGCATAGCATGTTCAAAGTTGCTCTGCGGTCCCGTCTAAGCTACTACTCAGTGATGGACCTCTTAACTTTAAGGCGTTTAGATTTCGGCCTTGCCATAATTCCGCTCGAGAGCCTATGATGCACCATAGCTTTAAGCTGTGGGTTTAGAAGATTGTCCATTAGAAAGTGCATAAAGAGCGAAGAAGCGATCAGTTCGCGGTCTCTTGTTACATGAATGTGCCGCTCTTCGTTTCGTGTTCGCCCATCTCCATAAAATTTTCCAGTTTGCGGTCGCCCCATTAGTGGGATAGAAAGTAGCCGGCCTCAAGCTCTTAGCGGTGCAACTCATCGCATACTAGCCAGAGAGCCTACCAAAAGGGGTTGGCAGCCATACATTTCAGCTAAGATCGGGCCTCCTAGAGAAGAGTACCACTTAACTCGCTAAAGAGGAATATGGTAGAGCGCGTTGGAAGGAAACCCCCAGCGAATTACCCCCGAGCATACATGCACATGTTGAAATTGTCTCGTTATCGGGAACTCTACGTTGACGTTACATTCGGTACGCAGAGGGAACTTCTCACGAGATACTTGGCAAACCCTGATCTATTCAAACCATATGCTTGAAAATGTCCTTTAGGAGCTGGGGGCCGAAGTACGCAAATTTATTCGTTGTATATCCTGCGACTTAGATCGACTTGCCGGATTCCTTTGCTGCCCAGCCAAACGTGGCACAGTGGAACGGAGTGCTCCCCCCCCCCTCCCAGTAGTTTTGCTACCGTATAGTCACTTGGGCCTTGGACCCGACTTAATGACCACCCTAGAGCTCCGGGGGGTATCAAACAGCGGCGTGGGGTGCCCCCCAACTGTAAGTAAGAGGACGTGCTACTTCAGACGGTGCACCCGTGTGTTCAGAGTCGCTGCTGGGAAGAACGGTTAAGGGTTCTCTCCATTACCGGAGCGTGTACTTTGTGGGTTATGCACTAAGATTCTGCAATGGTCCTGATATCTGTACAAATTTGCCCAAAGCACACCACTGCAAGGACTCCACGGCCTCATCAACCACCAACCTGGTGGGTCTAATGGTTCCTCGGGAGACTCCCCCAAAAGAGGGTTCGCGATCAAACACTATCCTTTTTTTAGAGTCGCTCTCATCTGTAGAAACCCTTCATGTACCACCAGATTAAAGAGTACTCCAAAAACTACCTGCCTATACGCATTCCCGTAAAAATCGACACCGCCAATTTGGCTAGGACAGACCCATAAAGGAATCTCTCTCATATTTAAGCAAACCCCGCTCGGGTATCGTCTATCGTTCTTCGAACGGGTTAGAGACGTAAGGGGGGTCCCTGGGAAATCGGCCGGAAAATTCGGATATTGCCGGAGCCTGGTTGGCAATATGTCAGACAAGTGTAATTCATCCCACTAATTCAGGTCGAATTGAAAAGGACTTCTGGGGAAAAGTGATTTAGCTGACCCGTGCAAAGGTGTCCTTTTATAAACCCTCGTACTGCGGGCCCGGGTATCGCGGCTATTCGAGTTCTCCTGCTGGAGTCTCCCCCTCTCCCTGAAGGAACTATGAGATATCTTACATTAAAAGTCTACTTCTAAGCATTAAGCACACTTGGGTTTGACCGGTGACGTAACTTATTTAGGCTTGGAGGCGGCCGGATCTCAAGTCCAGATCTCAGGGCCATCTGAGCGGGAATACGACCAATATAAAAAAAGAGTCACACTCGTGGCGGTCCACATTCATTTCCCTACCACGATTTCCGATTCCTCCTTACCCTAAGTAGTGTCTTGCCTGCGTGGGATTACGCGGAAATCGCGCCGGTCGCGTCCCAAGACTACCAAGTGAGAACTAGTCACGCAGTTAAGTCCAGTGGAATAATTCACTGCTCGTTGAGGGCGTATAAGATCCCGCATAAGACCCGATGTTGTAAATCGAGGCGAGGTCTAGTAAAAAGGCGTTCCTATCTTCCACAAGGAATACAGATCTCGAGTCATTGCGCTTAACTGTTCAACCCGACACGGGCATCGCACCTGAGTGTACTTCGGGACAACCTCGGTCCTACAGACGCTGTTCGTGCCCTCTGCAAGTATACATAACGTTGC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